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                                                                奧林巴斯顯微鏡:纖維的FISH(熒光原位雜交)

                                                                2019-06-12 19:16:04 61

                                                                這個術語是指纖維的FISH的普遍做法進行準備延長染色質纖維的熒光原位雜交(FISH)。映射還通過進行FISH調查,在染色體上的DNA片段,在幾百萬個堿基對的距離之內的信號彼此由于多方面的結構在中期染色體的DNA鏈是無法區分的。染色體信號的分辨率提高了,如果之前使用它們進步充分冷凝。我們可以做些什么,當我們要映射多個相鄰的DNA克隆嗎?創建地圖規模的一個堿基對整個基因組DNA序列的特性,將解決這個問題,但是是非常耗時的。

                                                                fish figure1

                                                                人類基因組的計算包含30,000-100,000基因,也就是說,1,200-4,000平均每條染色體基因。10-15千堿基對的平均大小排隊間隔40-45千堿基對的DNA鏈的基因。需要新的程序,以便產生包含這些基因的DNA片段的詳細地圖。

                                                                以下討論兩種機制來克服的分辨率限制使用時遇到的FISH中期染色體。段映射下有一萬個堿基對(Mbps)的分辨率可通過使用拉伸染色質(DNA)纖維。

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                                                                映射在一萬個基對(Mbps)的分辨率?

                                                                ·?FISH上相間核?-可以創建使用間期核染色質纖維延伸到細胞核的高分辨率地圖,因為他們更伸展時相比,在中期染色體(參見圖1)。本程序是可用于映射在分辨率為50-500千堿基對的DNA克隆,但其準確性有所減少,因為染色質纖維的延伸度各不相同。

                                                                ·?擴展的染色質纖維的制備?-?FISH檢測信號,較高的分辨率的方法,得到,通過人為延伸的DNA雜交(圖1)之前,在載玻片上的染色質纖維。?

                                                                ?

                                                                纖維的FISH過程?

                                                                ·?細胞分散在載玻片上,空氣干燥。

                                                                ·?洗滌劑(曲拉通X-100)在密閉容器中,在載玻片上的細胞裂解。

                                                                ·?染色質纖維的高度時,它慢慢地從容器中取出的載玻片。

                                                                ·?的制備用乙醇固定。

                                                                ·?上面的距離為5-700千堿基對的高的分辨率FISH成為可能。

                                                                ·?探針進行雜交后的標準程序。

                                                                目前用于纖維的FISH命令了一系列從染色體克隆的DNA片段,并估計這些克隆之間的距離。然而,仍然必須進行檢查DNA鏈的亞微觀層面更多的細節。亞顯微測量的難度使得跟蹤和距離測量不清楚。目前的研究正在探索潛在的方法可同時檢測信號和DNA鏈。掃描探針顯微鏡是一種很有前途的候選人。



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